25-羥基維生素D檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則（2020年第80號）

本指導原則旨在指導注冊申請人對25-羥基維生素D檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評部門(mén)對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導原則是對25-羥基維生素D檢測試劑的一般要求，申請人應依據產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學(xué)依據，并依據產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如有能夠滿(mǎn)足法規要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著(zhù)法規、標準體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內容也將適時(shí)進(jìn)行調整。

一、適用范圍

25-羥基維生素D檢測試劑用于體外定量測定人血清或血漿樣本中25-羥基維生素D（25-hydroxyvitamin D，25-OH-VD）的濃度。

本指導原則適用于以酶標記、（電）化學(xué)發(fā)光標記等標記方法標記捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等載體包被抗體，用于體外定量檢測人血清或血漿中25-羥基維生素D含量的免疫分析試劑盒。

本指導原則不適用于：

1.用膠體金或其他方法標記的定性或半定量測定人25-羥基維生素D的試劑（如試紙條、生物芯片等）；

2.擬用于單獨銷(xiāo)售的25-羥基維生素D校準品和25-羥基維生素D質(zhì)控品；

3.色譜法原理的25-羥基維生素D檢測試劑。

根據《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）和《食品藥品監管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類(lèi)子目錄的通知》（食藥監械管〔2013〕242號），25-羥基維生素D測定試劑管理類(lèi)別為Ⅱ類(lèi)，分類(lèi)編碼為6840。本指導原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

維生素D是一種脂溶性類(lèi)固醇衍生物，是人體必需的脂溶性維生素，經(jīng)紫外線(xiàn)照射后可轉化為維生素D2。人體從食物攝入或在體內合成的膽固醇經(jīng)轉變?yōu)?-脫氫膽固醇并貯存于皮下，經(jīng)紫外線(xiàn)照射后可轉化為維生素D3。維生素D主要有維生素D3（膽鈣化甾醇）和維生素D2（麥角鈣化甾醇）兩種形式。其水平受很多因素的影響，主要包括紫外線(xiàn)輻射、膳食補充、年齡和肥胖、種族和民族因素等。維生素D本身不具有生物活性，需要發(fā)生2次羥基化轉化為生物活性形式。第1次羥基化發(fā)生在肝臟，產(chǎn)生25-羥基維生素D，第2次羥基化主要發(fā)生在腎臟，產(chǎn)生具有生物活性代謝物1,25－二羥維生素D。當1,25-（OH）2D足量時(shí)，它可進(jìn)一步在腎臟轉化為24,25-（OH）2D，最后發(fā)生分解代謝。循環(huán)中的25-羥基維生素D的半衰期為2-3周。

因此，在醫學(xué)上，對血液中25-羥基維生素D的檢測經(jīng)常被用于確定體內維生素D的含量，血液中25-羥基維生素D的濃度被認為是體現人體維生素D狀態(tài)的最佳指標。

維生素D具有多重生物學(xué)作用。如可促進(jìn)小腸鈣吸收；促進(jìn)腎小管對鈣、磷的重吸收；調節血鈣平衡；其代謝物參與多種骨代謝途徑等等。維生素D缺乏與很多疾病的發(fā)生密切相關(guān)，包括骨骼疾病、自身免疫性疾病和心血管疾病等；過(guò)量攝入則可引起維生素D過(guò)多癥和腎結石等疾病。因此及時(shí)了解人體維生素D的狀態(tài)，實(shí)現維生素D的個(gè)體化補充具有重要的意義。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面說(shuō)明、產(chǎn)品主要研究結果的總結評價(jià)、同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹等內容，其中同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹部分應著(zhù)重從方法學(xué)、臨床應用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準的同類(lèi)產(chǎn)品之間的異同方面進(jìn)行介紹，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第44號）相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

1.主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標準及實(shí)驗驗證研究資料

檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細實(shí)驗資料。如抗體為申請人自制，則應詳述抗體的名稱(chēng)及生物學(xué)來(lái)源，申請人對該抗體技術(shù)指標的要求（如外觀(guān)、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時(shí)確定該抗體作為主要原材料的依據和質(zhì)量標準；如為申請人外購，則應詳述其名稱(chēng)及生物學(xué)來(lái)源，供應商名稱(chēng)，提交供應商出具的抗體性能指標及檢驗報告，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據。供應商應相對固定。

其他主要原材料的選擇及驗證資料，申請人應詳述每一原材料技術(shù)指標的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據，確定質(zhì)量標準。若為外購，應提供供應商名稱(chēng)并提交出具的檢驗報告。

2.質(zhì)控品、校準品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及實(shí)驗資料。

3.校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實(shí)驗方法、數據及統計分析等詳細資料。申請人應根據GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫療器械生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準品的來(lái)源、賦值過(guò)程和相應指標，以及不確定度等內容。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料（如需提供）

1.主要生產(chǎn)工藝的介紹，可以流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定方法，如各組分制備的工藝、試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數的確定等。企業(yè)應采用經(jīng)過(guò)驗證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

2.反應體系主要包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應校準品、樣本和試劑的用量，反應條件（緩沖體系、濃度、時(shí)間、溫度、波長(cháng)等條件）的確認資料及試驗數據，校準方法、質(zhì)控方法等。

3.不同適用機型的反應條件如果有差異應分別闡述。

（四）分析性能評估資料

申請人應當提交對申報試劑進(jìn)行性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價(jià)都應包括具體的研究項目、試驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數據、統計方法（如有）、研究結論等詳細資料。性能評估時(shí)建議將試劑和所選用的校準品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評價(jià)，評估整個(gè)系統的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括試驗地點(diǎn)、適用儀器（名稱(chēng)、型號、校準有效期）、試劑材料（名稱(chēng)、規格、批號、儲存溫度、有效期）及所選用的校準品和質(zhì)控品、臨床樣本來(lái)源等。

對于本試劑（盒），建議著(zhù)重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.準確度

對測量準確度的評價(jià)依次包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的相對偏差、回收試驗等方法，申請人可根據實(shí)際情況選擇以下方法的一項或幾項進(jìn)行研究。優(yōu)先采用與國家（國際）標準品的比對研究。

1.1相對偏差法

如有相應國家（國際）標準品，則使用國家（國際）標準品進(jìn)行驗證，重點(diǎn)觀(guān)察對相應標準品檢測結果的偏差情況。申報試劑實(shí)測值與相應國家（國際）標準品的相對偏差應不超過(guò)±15%。

采用可用于評價(jià)常規方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進(jìn)行測試，重復檢測3次，取測試結果記為（Xi），按公式（1）計算相對偏差（Bi）。實(shí)測值與標示值的相對偏差應在±15%范圍內，如果3次結果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結果不合格，即判為不合格。如果有1次結果不符合要求，則應重新連續測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結果符合要求，則準確度判定合格。

Xi—測試濃度；

T—標定濃度；

Bi—相對偏差。

注：首選國家參考物質(zhì)，如無(wú)國家參考物質(zhì)可選用國際參考物質(zhì)。

1.2回收試驗

用于評估定量檢測方法準確測定待測分析物的能力，結果用回收率表示,是評估準確度的方法之一。

將已知濃度的高水平待測物（A）加入到低濃度的血清（或其他體液成分）B中,所加待測物A 與血清（或其他體液成分）B之間的體積比例為不大于1∶9，各重復檢測3次，取平均值?？蓞⒖脊剑?）計算回收率，25-羥基維生素D試劑盒各樣本回收率及平均回收率應在[85%, 115%]范圍間。

式中：

R—回收率；

C—向B液中加入A 液后的檢測濃度的平均值;

V0—B液體積；

Vs—A 液體積；

C0—B液濃度的平均值；

Cs—A 液濃度。

回收試驗注意事項：

1.2.1所加待測物A 與血清（或其他體液成分）B之間的體積比例應不會(huì )產(chǎn)生基質(zhì)的變化，一般在樣本體積的10%以?xún)炔⑶冶ＷC在加樣過(guò)程中的取樣準確度；

1.2.2保證總濃度在方法分析測量范圍內，盡量使加入待測物后樣本中的被測物濃度達到參考值；

1.2.3可通過(guò)稀釋標準物制備不同高濃度的待測物以得到不同濃度的回收樣本，標準物的濃度應該足夠高；

1.2.4為減少基質(zhì)效應，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)，如血清（或其他體液成分）。

1.3方法學(xué)比對

采用參考方法或國內/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類(lèi)試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時(shí)檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），40例樣本為在檢測濃度范圍內不同濃度的人源樣品，且盡可能均勻分布。

從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚（參考值處）在企業(yè)規定的允許誤差范圍內，說(shuō)明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學(xué)解釋?zhuān)瑪M申報試劑與對比方法相比不會(huì )產(chǎn)生顯著(zhù)差異結果。

在實(shí)施方法學(xué)比對前，應分別對擬申報試劑和比對試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進(jìn)行方法學(xué)比對。方法學(xué)比對時(shí)應注意質(zhì)量控制、樣本類(lèi)型、濃度分布范圍并對結果進(jìn)行合理的統計學(xué)分析。

建議與具有相同溯源性的分析系統作比對,相關(guān)系數（r）及對應斜率、相對偏差/絕對偏差應符合申請人的內部要求，并提供制定該要求的相關(guān)依據。

方法學(xué)比對注意事項：

1.3.1樣本貯存時(shí)間及條件由被測組分的穩定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品；

1.3.2樣品應來(lái)自于患者，并且此患者的疾病對于被測組分的影響應明確，盡量不使用含有干擾此方法的組分或條件的樣本；

1.3.3分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內均勻分布。

2.空白限、檢出限

申請人可參考國際或國內有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件確定25-羥基維生素D試劑盒的空白限、檢出限及參考區間等相關(guān)信息。25-羥基維生素D試劑盒（標記免疫分析法）產(chǎn)品檢出限應不高于8.1ng/mL。

空白限：一般由多個(gè)空白樣本的檢測結果，經(jīng)計算獲得。當前階段，企業(yè)申報的25-羥基維生素D試劑盒（標記免疫分析法）均采用競爭法。針對競爭法原理，可使用檢測零濃度校準品或樣本稀釋液的方法進(jìn)行。例如重復測定20次，根據測量結果的平均值（M）和標準差（SD），計算M-2SD及其對應的濃度值，結果應符合規定要求。

檢出限：一般由多個(gè)低濃度（含有分析物）樣本的檢測結果，結合空白限進(jìn)行計算獲得，應根據具體產(chǎn)品的原理、檢測結果差異和分布，選擇合適的模型和分析方法（非參數/參數數據）進(jìn)行計算。

空白限及檢出限的驗證：對5份濃度近似檢出限的低值樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結果按大小進(jìn)行排序。低于申請人所確定的空白限數值的檢測結果的數量應小于或等于3個(gè)；且無(wú)高于申請人提供的參考區間下限的檢測結果的數值。此時(shí)，可認為申請人提供的空白限和檢出限的設置基本合理。

檢出限注意事項：空白樣本應不含被測物，但其基質(zhì)應與待測定常規樣本相同。如空白樣本難以得到，可采用去除維生素D的5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根據測定項目選用相應基質(zhì)的樣本，但應注意將基質(zhì)效應減至最小。

3.線(xiàn)性

建立試劑線(xiàn)性范圍所用的樣本基質(zhì)應與臨床樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清（或其他人源樣本），且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線(xiàn)性范圍時(shí)，需在預期測定范圍內選擇7～11個(gè)濃度水平（建議采用梯度稀釋?zhuān)?。例如，將預期測定范圍加寬至130%，在此范圍內選擇更多的濃度水平，然后依據實(shí)驗結果逐漸減少數據點(diǎn)直至表現出線(xiàn)性關(guān)系，可發(fā)現最寬的線(xiàn)性范圍。

驗證線(xiàn)性范圍時(shí)可選擇5～7個(gè)濃度水平。所選用的濃度水平應可覆蓋整個(gè)預期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價(jià)濃度，如最小測定濃度或線(xiàn)性范圍的最低限、不同的參考值、最大測定濃度或線(xiàn)性范圍的高限等。采用申報試劑對每個(gè)濃度至少重復測試3次，計算平均值，將結果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性擬合，計算線(xiàn)性相關(guān)系數r，線(xiàn)性范圍應覆蓋[8.1, 70.0] ng/mL，在申請人宣稱(chēng)的線(xiàn)性范圍內，相關(guān)系數r應≥0.99。

4.重復性

測量重復性的評估應至少包括2個(gè)濃度水平的樣本，兩個(gè)濃度都應在申報試劑的測量范圍內，建議采用人源樣本或與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進(jìn)行試驗。當2個(gè)濃度的重復性有顯著(zhù)差異時(shí)，建議增加為三個(gè)濃度。

采用同一批試劑盒對選擇濃度在[8, 20] ng/mL和[30, 50] ng/mL的樣本各重復測試10次，計算10次測定濃度結果的平均值M和標準差SD，根據式（3）計算變異系數（CV）應不大于10%。

CV—變異系數；

SD—10次測量結果的標準差；

M—10次測量結果的平均值。

5.批間差

用3個(gè)批號的試劑（盒）分別測試同一濃度為[30, 50] ng/mL的樣本，各重復測定10次，計算30次測定濃度結果的平均值M和標準差SD，根據式（4）得到變異系數（CV）應≤15%。

CV—變異系數；

SD—30次測量結果的標準差；

M—30次測量結果的平均值。

6.分析特異性

推薦參考《WS/T416-2013 干擾實(shí)驗指南》或相關(guān)國際、國內有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行特異性評估。

6.1交叉反應：易產(chǎn)生交叉反應的其他物質(zhì)的驗證情況，如與其他維生素D代謝產(chǎn)物的交叉反應情況。應至少驗證與1,25（OH）2D2、1,25（OH）2D3的交叉反應情況。

6.2干擾物質(zhì)：樣本中常見(jiàn)干擾物質(zhì)對檢測結果的影響，如內源性干擾物（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、總蛋白等）、類(lèi)風(fēng)濕因子（Rheumatoid Factor，RF）、抗核抗體（Antinuclear Antibody，ANA）、人抗鼠抗體（Human Antimouse Antibody，HAMA）等干擾因子的研究。

干擾物濃度的分布應覆蓋人體樣本生理及病理狀態(tài)下可能出現的物質(zhì)濃度。建議將研究結果在說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行說(shuō)明。如無(wú)法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進(jìn)行驗證。方法為對模擬添加樣本分別進(jìn)行驗證，樣本量選擇應體現一定的統計學(xué)意義，說(shuō)明樣本的制備方法及干擾試驗的評價(jià)標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度，結果應量化表示，禁用輕度、嚴重的模糊表述。被測物濃度至少應包括其參考值的濃度。

6.3藥物干擾的研究可根據需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。

6.4抗凝劑的干擾：如果申報試劑適用樣本類(lèi)型包括血漿樣本，應采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比試驗研究。方法為對比線(xiàn)性范圍內的同一病人的血清和血漿樣本（應包含參考值以及低值濃度樣本的檢測），以驗證申報試劑對于血清和血漿樣本檢測結果的一致性。樣本量選擇應體現一定的統計學(xué)意義，說(shuō)明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗的評價(jià)標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

7.可報告范圍（如適用）

可報告范圍包括可報告低限與可報告高限。低值樣本即將待測樣本進(jìn)行稀釋?zhuān)a(chǎn)生接近于方法線(xiàn)性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個(gè)濃度水平，濃度水平間隔應小于線(xiàn)性范圍低限的10%，重復測定10次，選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平作為可報告范圍低限。高值樣本即選取含被測物的高值樣本進(jìn)行稀釋?zhuān)蛊浣咏诰€(xiàn)性范圍的上1/3區域內，并記錄稀釋倍數。至少選用三個(gè)高濃度樣本，稀釋倍數應為方法性能標明的最大稀釋倍數、并適當增加或減小稀釋比例，重復測定3次，試驗過(guò)程應明確稀釋液類(lèi)型，注意基質(zhì)效應影響，必要時(shí)應提供基質(zhì)效應研究有關(guān)的資料。選取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法標示CV值時(shí)的最大稀釋倍數為方法推薦的最大稀釋倍數，方法線(xiàn)性范圍的上限與最大稀釋倍數的乘積為該方法可報告范圍的高限。

8.其他需注意問(wèn)題

8.1 對于適用多個(gè)機型的產(chǎn)品，應提供產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。對于某些性能，可采用主機型進(jìn)行充分的性能研究，其他機型采用驗證的試驗方案進(jìn)行。但對于主機型的判斷，應有充分依據。

8.2 如有多個(gè)包裝規格，需要對不同包裝規格之間的差異進(jìn)行分析或驗證，如不同包裝規格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評估的資料。如不同包裝規格之間不存在性能差異，企業(yè)需要提交包裝規格之間不存在性能差異的分析，可僅選擇代表規格進(jìn)行分析性能評估。

8.3 針對技術(shù)要求中所列性能指標，應當對多批（至少三批）產(chǎn)品進(jìn)行分析評估，并對結果進(jìn)行統計分析。其他性能指標的評估申請人可結合自身產(chǎn)品特點(diǎn)確定評估批次/數量。

8.4 校準品溯源及質(zhì)控品賦值（如適用）

應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度的研究資料，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

8.5校準品及質(zhì)控品性能評估（如適用）

如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，建議應對其性能進(jìn)行評估應至少包含外觀(guān)、裝量、準確度、均一性。

8.6生物安全性（如適用）

試劑盒如含人源性成分，至少使用經(jīng)過(guò)國家批準合格的人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、梅毒螺旋抗體診斷試劑盒，對該申報試劑盒（包括校準品、質(zhì)控品）進(jìn)行檢測，檢測結果應均為陰性。

（五）參考區間確定資料

應提交建立/驗證參考區間所采用樣本來(lái)源、詳細的試驗資料、統計方法等。明確參考人群的納入、排除標準，離群值的處理，考慮不同年齡、性別、生活習慣、地域等因素，盡可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性，樣本例數應符合統計學(xué)要求。

建議申請人根據臨床實(shí)際情況，參考《WS/T 402-2012臨床實(shí)驗室檢驗項目參考區間的制定》或其他國際國內權威文件來(lái)確定申報試劑的參考區間。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究可參考YY/T 1579-2018《體外診斷醫療器械體外診斷試劑穩定性評價(jià)》的相關(guān)要求進(jìn)行研究。主要涉及申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究?jì)刹糠謨热?。前者主要包括?shí)時(shí)穩定性、開(kāi)瓶（復溶）穩定性、溶解后凍存穩定性（若涉及）等研究，申請人可根據實(shí)際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實(shí)驗方案、過(guò)程、詳細的研究數據以及結論。對于實(shí)時(shí)穩定性研究，應提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的穩定性研究資料。如產(chǎn)品包含校準品和質(zhì)控品，應提供相應穩定性實(shí)驗研究資料。

樣本穩定性應考慮在不同儲存條件（室溫保存、冷藏和冷凍）下對不同類(lèi)型樣本進(jìn)行有效期驗證，主要包括評價(jià)方法的確定依據、具體實(shí)驗方法、過(guò)程和結論。建議申請人選擇合理溫度范圍/溫度點(diǎn)，每間隔一定的時(shí)間段對儲存樣本進(jìn)行穩定性驗證，從而確認樣本在不同溫度下儲存的有效期。試劑穩定性和樣本穩定性?xún)刹糠謨热莸难芯拷Y果均應在說(shuō)明書(shū)【儲存條件及有效期】和【樣本要求】?jì)身椫羞M(jìn)行詳細說(shuō)明。

（七）臨床評價(jià)資料

此項目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進(jìn)行臨床試驗醫療器械目錄的通告》（國家藥品監督管理局通告2018年第94號）免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑目錄中。根據體外診斷試劑臨床評價(jià)的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價(jià)資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監督管理總局通告2017年第179號）要求進(jìn)行臨床評價(jià)。如免臨床試驗的相關(guān)指導原則有更新，應符合相應的指導原則要求。

申請人如無(wú)法或不適于上述開(kāi)展臨床評價(jià)要求的，則應按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的要求開(kāi)展臨床試驗。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節，從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預見(jiàn)的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，應符合YY/T 0316—2016 《醫療器械風(fēng)險管理對醫療器械的應用》的要求。

風(fēng)險分析資料應包含以下內容：

1.概述：簡(jiǎn)要介紹風(fēng)險分析資料的編制依據、適用范圍、產(chǎn)品描述（名稱(chēng)、用途、適用機型）、風(fēng)險管理計劃及實(shí)施情況等；

2.風(fēng)險管理人員及其職責分工：明確風(fēng)險管理小組成員及職責，制定風(fēng)險管理流程圖，明確風(fēng)險管理活動(dòng)的評審要求等；

3.風(fēng)險來(lái)源分析：明確風(fēng)險可能的來(lái)源（如產(chǎn)品故障、使用條件或環(huán)境差異、用戶(hù)端風(fēng)險、產(chǎn)品壽命等）；

4.預期用途和安全性有關(guān)特征的判定：以YY/T 0316—2016附錄H為基礎，判定產(chǎn)品預期用途和與安全性有關(guān)的特性，判定已知和可預見(jiàn)的危害、對患者風(fēng)險的評估，并形成問(wèn)題清單；

5.風(fēng)險分析、風(fēng)險控制和風(fēng)險控制措施：對每一判定為危害的不正確結果的風(fēng)險進(jìn)行分析，并制定相應的風(fēng)險控制方案及措施；

6.綜合剩余風(fēng)險的可接受性評價(jià)：對比采取風(fēng)險控制措施前后的風(fēng)險情況，對剩余風(fēng)險的可接受性進(jìn)行評價(jià)；

7.風(fēng)險控制措施驗證：對風(fēng)險控制措施的有效性進(jìn)行驗證分析；

8.風(fēng)險管理評審結論：風(fēng)險管理小組下達風(fēng)險評審結論。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局局令第5號）和《國家食品藥品監督管理總局關(guān)于發(fā)布醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規定。申請人應按照相關(guān)要求編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求，內容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法。

產(chǎn)品技術(shù)要求應不低于YY/T 1585—2017《總25-羥基維生素D測定試劑盒（標記免疫分析法）》的要求。性能指標應至少包括外觀(guān)、溯源性、準確度、檢出限、線(xiàn)性、重復性、批間差。

（十）產(chǎn)品檢驗報告

根據《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》的要求，應提供具有相應醫療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫療器械檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預評價(jià)意見(jiàn)。如有相應的國家法規發(fā)布或更新，按其要求執行。

（十一）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗原理、檢驗方法、樣本要求、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實(shí)驗室工作人員正確操作、臨床醫生針對檢驗結果給出合理醫學(xué)解釋的重要依據。因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的編寫(xiě)應符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求。境外試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規范格式對此內容進(jìn)行標注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。

以下僅對25-羥基維生素D檢測試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內容進(jìn)行詳細說(shuō)明，說(shuō)明書(shū)其他內容應根據《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》要求進(jìn)行編寫(xiě)。

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)內容原則上應全部用中文進(jìn)行表述，如含有國際通用或行業(yè)內普遍認可的英文縮寫(xiě)，可用括號在中文后標明，對于確實(shí)無(wú)適當中文表述的詞語(yǔ)，可使用相應英文或其縮寫(xiě)。

1.【產(chǎn)品名稱(chēng)】

1.1試劑名稱(chēng)由三部分組成：被測物名稱(chēng)、用途、方法或原理。例如：25-羥基維生素D測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。

注：名稱(chēng)中不應當出現樣本類(lèi)型、定性/定量等內容。

1.2英文名稱(chēng)（如有）應當正確、完整，可直譯，不宜只寫(xiě)縮寫(xiě)。

2.【包裝規格】

注明可測試的樣本數或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內容均應采用中文進(jìn)行表述。應與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規格一致，不得出現試劑盒的組成成分與包裝規格中描述不一致的情況。

3.【預期用途】

3.1第一段詳細說(shuō)明試劑盒用于體外定量測定血清和/或血漿中的25-羥基維生素D的含量，適用的樣本類(lèi)型應結合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認。

3.2應闡述與預期用途相關(guān)的臨床適應癥及背景情況，說(shuō)明相關(guān)的臨床或實(shí)驗室診斷方法等。

4.【檢驗原理】

詳細說(shuō)明檢驗原理、方法，必要時(shí)可采用圖示方法描述。

5.【主要組成成分】

5.1試劑盒包含的試劑組分的名稱(chēng)、數量、每個(gè)組成成分在反應體系中的比例或濃度、其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性。明確說(shuō)明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2對于非試劑組分，如實(shí)驗用耗材（塑料滴管、封板膜、自封袋）、質(zhì)量控制證書(shū)、賦值表（靶值單）、校準卡等，應注明相關(guān)信息。

5.3對于試劑盒中不包含，但對檢驗必需的試劑組分，應列出此類(lèi)試劑的名稱(chēng)、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。

5.4試劑盒中如包含校準品和/或質(zhì)控品，除明確其組成成分及生物學(xué)來(lái)源外，校準品應明確其定值及溯源性，溯源性應寫(xiě)明溯源的最高級別，包括標準物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。質(zhì)控品應明確靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6.【儲存條件及有效期】

6.1對試劑盒的效期穩定性、開(kāi)瓶穩定性等信息做詳細介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等影響穩定性的條件。如注冊單元含校準品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應對復溶后的儲存條件、穩定性做詳細介紹。如試劑需要配制，則應對配制后的試劑的儲存條件、穩定性做詳細介紹。

6.2保存溫度不應有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應直接以℃為單位。小于3個(gè)月的穩定期建議應以日為單位，大于或等于3個(gè)月的穩定期限建議以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩定性不一致，則應對各組分的儲存條件和有效期分別進(jìn)行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應注明凍融次數限制。

6.5注明生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見(jiàn)標簽）。

7.【適用儀器】

說(shuō)明可適用的儀器及型號，不能泛指某一系列儀器，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶(hù)能夠正確選擇使用；若不同規格適用不同機型也應說(shuō)明，且與分析性能評估資料一致。

8.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內容：

8.1適用的樣本類(lèi)型，為保證樣本各組分穩定所必需的抗凝劑或保護劑等。

8.2在樣本收集過(guò)程中的特別注意事項。如采集方式、采集時(shí)間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，詳述操作過(guò)程注意事項，減少由于樣本采集或處理不當對實(shí)驗造成的影響。

8.3已知的干擾物。

8.4能夠保證樣本穩定的儲存、處理和運輸方法。

8.5應與樣本穩定性的研究一致。

9.【檢驗方法】

為保證試劑的正確性，應在以下幾個(gè)方面對試驗操作的每一步驟進(jìn)行詳細說(shuō)明，包括：

9.1試劑配制：詳細說(shuō)明各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的處理程序、試劑的使用方法（手工/半自動(dòng)/全自動(dòng)）、注意事項等。

9.2試驗條件：如pH值、溫度、每一步試驗所需的時(shí)間、測定主/副波長(cháng)、試劑用量、樣本用量、測定方法、最終反應產(chǎn)物的穩定性等。待測樣品的預處理方法、試驗過(guò)程中的注意事項。

9.3校準程序（如需要）：校準品的使用方法、步驟、注意事項，校準有效期及需要重新校準的情況。對于適用于手工/半自動(dòng)儀器的試劑（盒）產(chǎn)品，應說(shuō)明校準曲線(xiàn)的繪制方法。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法，對質(zhì)控結果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.5試驗結果的計算或讀取，應包括對每個(gè)系數及每個(gè)計算步驟的解釋?zhuān)绻赡芘e例說(shuō)明。

10.【參考區間】

結合參考區間確定的研究資料，列出25-羥基維生素D試劑（盒）的參考區間，并簡(jiǎn)要說(shuō)明參考區間確定的方法，如樣本量、人群、年齡、統計方法等。建議注明以下字樣“由于維生素D其水平受諸多因素影響，建議各實(shí)驗室建立自己的參考區間”。

11.【檢驗結果的解釋】

應根據其臨床意義對可能出現的結果進(jìn)行合理的解釋。

說(shuō)明試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗室檢查等情況綜合考慮。

說(shuō)明在何種情況下應對樣本進(jìn)行重復測試，以及在重復測試時(shí)需要采取的樣本處理方式。

超出檢測范圍的樣本怎樣報告結果，如要得到準確的結果需怎樣處理，如需稀釋?zhuān)瑧⒚飨♂尫椒?、最佳或最大稀釋比例等?/span>

12.【檢驗方法的局限性】

說(shuō)明檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據。

說(shuō)明可能對試驗結果產(chǎn)生影響的因素，明確常見(jiàn)干擾物質(zhì)對檢測結果的影響，企業(yè)可根據自身情況，結合分析性能評估中的干擾試驗進(jìn)行說(shuō)明，并注明可接受的最高限值，不應使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

13.【產(chǎn)品性能指標】

與技術(shù)要求中主要性能指標保持一致，應至少包括：檢出限、準確度、線(xiàn)性、重復性、批間差等。

14.【注意事項】

14.1必要內容，如：“本試劑盒僅用于體外診斷”。

14.2說(shuō)明檢測過(guò)程中應嚴格按照說(shuō)明書(shū)提供的操作步驟及相關(guān)實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作，否則可能對結果造成的影響。

14.3如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應給出具有潛在感染性的警告。如：試劑盒內的質(zhì)控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過(guò)了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab和Anti-TP等項目的檢測，但截至目前，沒(méi)有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.4說(shuō)明對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待，廢棄物應當按當地法規處置等。

14.5說(shuō)明不同分析系統間的檢測結果可能存在的差異。

14.6其他需要說(shuō)明的注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義?？蓞⒖枷嚓P(guān)標準：YY/T 0466.1-2016。

16.【參考文獻】

注明引用參考文獻，其書(shū)寫(xiě)應清楚、易查詢(xún)且格式規范統一，符合相關(guān)標準要求。

17.【基本信息】

應符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》對基本信息的要求。

18.【醫療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

注明該產(chǎn)品的醫療器械注冊證編號。

19.【說(shuō)明書(shū)核準日期及修改日期】

應注明該產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的核準日期，如曾進(jìn)行過(guò)說(shuō)明書(shū)的變更申請，還應該同時(shí)注明說(shuō)明書(shū)的修改日期。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

1.技術(shù)要求中性能指標的設定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標準的要求，技術(shù)要求的格式是否符合《醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規定。

2.產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的編寫(xiě)內容及格式是否符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第17號）的要求。

3.分析性能評估指標及結果是否滿(mǎn)足產(chǎn)品技術(shù)要求的規定，是否滿(mǎn)足本規范中各指標驗證的要求。

4.參考區間確定使用的方法是否合理，數據統計是否符合統計學(xué)的相關(guān)要求，結論是否和說(shuō)明書(shū)聲稱(chēng)一致。

5.穩定性研究方法是否合理，穩定性結論是否和說(shuō)明書(shū)聲稱(chēng)一致。

6.如采用臨床試驗的途徑進(jìn)行臨床評價(jià)，臨床試驗采用的樣本類(lèi)型是否滿(mǎn)足產(chǎn)品聲稱(chēng)的預期用途，樣本量及臨床試驗機構的選擇、對比試劑的選擇、統計方法及研究結果、臨床方案及報告撰寫(xiě)等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內容的規定；如采用免臨床試驗進(jìn)行同品種比對臨床評價(jià)，則審查是否符合《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價(jià)資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監督管理總局通告2017年第179號）對相關(guān)內容的規定。

四、編寫(xiě)單位

廣東省藥品監督管理局審評認證中心