人細小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對人細小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評部門(mén)審評注冊申報資料提供依據。

本指導原則是對人細小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑的一般要求，申請人應依據產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學(xué)依據，并依據產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著(zhù)法規、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內容也將適時(shí)進(jìn)行調整。

一、適用范圍

人細小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑是指基于抗原抗體反應原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法等檢測技術(shù)，對來(lái)源于血清或血漿等人體樣本中的B19 IgM/IgG抗體進(jìn)行體外定性檢測的試劑。其臨床預期用途為：結合臨床表現和其他實(shí)驗室指標，可用于急性及慢性人細小病毒B19感染的輔助診斷及免疫狀態(tài)的評估和急性及慢性感染患者抗體的血清學(xué)轉換的判定。

人細小病毒B19（parvovirus B19，簡(jiǎn)稱(chēng)B19病毒）屬于細小病毒科（Parvoviridaefamily），紅病毒屬（Erythrovirusgenus），無(wú)包膜，是單鏈線(xiàn)狀DNA病毒?？梢员环譃?/span>1、2、3三種基因型，其中1型和3型又各自分為兩種亞型。B19病毒感染在人群中普遍存在，可通過(guò)呼吸道、血液、胎盤(pán)等進(jìn)行傳播，并且可在各年齡段中發(fā)生，尤其在孕婦和兒童中多見(jiàn)。易感人群還包括免疫功能缺陷或者不全的患者及貧血患者。兒童感染后最常引發(fā)傳染性紅斑；免疫力正常人群感染后一般為輕型自限性癥狀；孕婦感染可造成胎兒水腫和貧血，嚴重時(shí)導致胎兒死亡；先天免疫缺陷患者、獲得性免疫缺陷患者、腫瘤或器官移植手術(shù)后進(jìn)行化療的患者感染會(huì )導致慢性貧血癥；鐮狀細胞貧血癥等血液系統疾病患者感染會(huì )發(fā)生一過(guò)性再生障礙性危象而導致急性貧血；部分感染患者會(huì )出現關(guān)節疼痛等癥狀，隨后演變?yōu)槎喟l(fā)性關(guān)節炎。

病毒血癥的后期階段，特異性IgM抗體開(kāi)始出現。IgM抗體出現后可持續約5個(gè)月或者更久，對B19病毒特異IgM進(jìn)行檢測可用于近期感染和疾病的早期診斷。B19病毒感染后約第15天，開(kāi)始出現特異性IgG抗體，持續數月甚至終生。B19病毒有兩種衣殼蛋白VP1和VP2，一個(gè)非結構蛋白NS1。其中VP1和VP2組成衣殼包裹在B19病毒DNA表面，構成B19病毒的抗原性。針對結構蛋白VP1和VP2構象性表位的IgG抗體可維持高滴度數月，并長(cháng)期存在體內，對該類(lèi)IgG抗體進(jìn)行檢測可用于既往感染的診斷和流行病學(xué)調查研究。

不同人群感染B19病毒后產(chǎn)生不同強度的免疫應答反應。健康成年人感染B19病毒后抗體反應非常強，能檢測到高滴度的特異性IgM抗體。B19病毒感染后在免疫功能正常兒童可產(chǎn)生特異性抗體，發(fā)病后數日可檢出IgM，持續數月。當患有溶血性貧血兒童感染B19病毒并發(fā)生再障危象時(shí)，IgM抗體反應特別強。此外，慢性血液病患者、免疫缺陷或抑制患者，有時(shí)缺乏可檢測到的抗體反應。

B19病毒感染檢測的常用方法有血清學(xué)抗體檢測、核酸檢測以及抗原檢測，其中B19病毒血清學(xué)抗體檢測是目前B19病毒感染臨床輔助診斷和流行病學(xué)調查研究的主要方法，用于對傳染性紅斑患者、或有B19病毒感染者接觸史、不明原因發(fā)熱、關(guān)節痛癥狀的高危對象進(jìn)行檢測。血清學(xué)抗體檢測常應用于母體出現B19病毒感染臨床癥狀、有可疑或確診的B19病毒感染暴露史以及發(fā)現胎兒貧血后的情況。如懷疑孕婦有B19病毒接觸史以及發(fā)現胎兒存在貧血的癥狀，建議盡早對母體血液中B19病毒的IgM和IgG抗體進(jìn)行檢測，聯(lián)合使用B19病毒DNA檢測、超聲檢查以及持續觀(guān)察有無(wú)胎兒水腫或貧血等手段，用于妊娠期B19病毒感染的輔助診斷以及免疫狀態(tài)的評價(jià)。

鑒于母體感染細小病毒B19不能作為胎兒感染的證據，并且大多數妊娠期急性細小病毒B19感染無(wú)不良妊娠結局的發(fā)生，本類(lèi)試劑不用于孕期B19病毒感染的產(chǎn)前篩查。即該類(lèi)產(chǎn)品不用于對母體以及胎兒無(wú)細小病毒B19相關(guān)癥狀的人群進(jìn)行檢測。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結果的總結評價(jià)以及同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹等內容。建議申請人對以下幾方面內容進(jìn)行著(zhù)重介紹：

1.臨床適應癥背景情況

描述B19病毒的生物學(xué)特征、流行病學(xué)特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時(shí)間等）、易感人群、感染后的臨床表現和相關(guān)疾病、現有的臨床診斷方法或其他實(shí)驗室檢查方法等。

2.同類(lèi)產(chǎn)品上市情況

從技術(shù)方法及預期用途等方面寫(xiě)明申報產(chǎn)品與現行臨床診斷方法以及目前市場(chǎng)上已獲批準的同類(lèi)產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。

（二）主要原材料研究資料

由于B19病毒不同的抗原（VP1或VP2）以及表位（線(xiàn)性或構象）類(lèi)型對于IgM/IgG抗體的檢出能力不同；因此在選擇產(chǎn)品原料時(shí)，應注重上述抗原以及表位的選擇，避免抗原或者表位的差異造成的假陰性。原材料研究資料中應詳述此方面的考慮。另外，建議加入產(chǎn)品校準品。

1.試劑盒所用病原體抗原

首先應詳述確定該抗原作為主要原材料的依據，此外應提交抗原來(lái)源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標準（蛋白純度、濃度、功能性試驗等）等詳細試驗資料。

主要包括以下兩種情況：

1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應對B19病毒毒株選擇、培養、抗原提取、純化、鑒定等實(shí)驗過(guò)程予以詳述。如為重組抗原，則應提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構建及轉化，抗原表達及純化、鑒定等詳細資料。

1.2企業(yè)外購抗原

應詳述抗原的名稱(chēng)，抗原生物學(xué)來(lái)源，供應商名稱(chēng)，提交供應商選擇的研究資料及供應商出具的抗原性能檢驗報告。

2.其他主要原輔料

應提交各種原輔料的選擇及驗證資料，如固相載體、硝酸纖維素膜、化學(xué)發(fā)光劑、反應緩沖液等，應詳述確定該原輔料作為主要原輔料的依據，說(shuō)明每一原輔料的供應商名稱(chēng)，提交供應商出具的每一原輔料性能指標及檢驗報告，詳述申請人對每一原輔料技術(shù)指標要求并提交檢驗數據。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應介紹血細胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗證去除效果。

3.試劑盒質(zhì)控品（如有）

應包括原料來(lái)源、質(zhì)控品制備、陰陽(yáng)性確認等研究資料。質(zhì)控品至少包含陰性和弱陽(yáng)性?xún)蓚€(gè)水平，陽(yáng)性質(zhì)控品可選擇臨床陽(yáng)性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或樣本稀釋液。免疫層析方法學(xué)應詳述質(zhì)控線(xiàn)相關(guān)原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗體）的選擇依據和質(zhì)量標準。

4.企業(yè)參考品

應提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認等相關(guān)驗證資料，說(shuō)明參考品陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認的方法或試劑（建議采用國內已上市的、臨床上普遍認為質(zhì)量較好的同類(lèi)試劑）。B19病毒 IgG 抗體的量值單位可以IU/ml表示。企業(yè)參考品的基質(zhì)應與待測樣本相同。對于同時(shí)檢測IgM和IgG抗體的試劑，應對IgM和IgG抗體分別設置企業(yè)參考品。建議如下：

4.1陽(yáng)性參考品和陰性參考品

陽(yáng)性參考品應考慮B19病毒 IgM/IgG 抗體檢出能力的驗證，可選擇多份確認為陽(yáng)性的臨床樣本，并設置不同滴度水平。陰性參考品應考慮檢測特異性的評價(jià)，納入類(lèi)風(fēng)濕因子、ToRCH病原體（弓形蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、巨細胞病毒及單純皰疹病毒）以及人類(lèi)免疫缺陷病毒特異性抗體陽(yáng)性樣本。

4.2檢測限參考品

可為參考物質(zhì)或臨床陽(yáng)性樣本的系列稀釋樣本，其中應包含檢測限水平。

4.3精密度參考品

至少包括弱陽(yáng)性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據。

2.產(chǎn)品基本反應原理介紹。

3.包被工藝研究，申請人應考慮如包被液量、濃度、時(shí)間等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗確定上述指標的最佳組合。

4.顯色（發(fā)光）系統、酶作用底物等的介紹。

5.實(shí)驗體系反應條件確定：申請人應考慮反應時(shí)間、反應溫度、洗滌次數等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗確定上述條件的最佳組合。

6.酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

7.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結果的影響，通過(guò)實(shí)驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過(guò)試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

8.對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結果的影響，合理設置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設計中采用的避免IgG對IgM檢測結果造成影響的合理措施。

（四）分析性能評估資料

企業(yè)應提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、驗收標準、試驗數據、統計分析方法等詳細資料。對于本類(lèi)產(chǎn)品建議著(zhù)重對以下分析性能進(jìn)行研究。IgM抗體、IgG抗體應分別研究。

1.適用的樣本類(lèi)型

如果試劑適用于多種樣本類(lèi)型，應采用合理方法評價(jià)每個(gè)樣本類(lèi)型的適用性。對于可比樣本（如血清、血漿），可采用同源比對的方法進(jìn)行驗證；對于不可比樣本，應對每個(gè)樣本類(lèi)型分別進(jìn)行性能評估。

2.最低檢測限

確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽(yáng)性樣本梯度稀釋進(jìn)行最低檢測限確定。建議設置多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預設檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復檢測20次，將具有95%陽(yáng)性檢出率的最低濃度作為最低檢測限。

驗證：選擇具有時(shí)間和區域特征性的至少3個(gè)臨床樣本（與最低檢測限確定不同樣本）在最低檢測限濃度水平進(jìn)行驗證，應達到95%陽(yáng)性檢出率。

采用的稀釋液應與適用樣本類(lèi)型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進(jìn)行稀釋。同時(shí)應提供詳細的抗體類(lèi)型和滴度的確認方法及驗證結果。

3.包容性驗證

選擇中國境內來(lái)源于不同地域、不同人群的不少于30份B19病毒抗體弱陽(yáng)性的患者樣本進(jìn)行研究。制備方式可為臨床陰性樣本作為基質(zhì)稀釋陽(yáng)性樣本，樣本性質(zhì)的確認方法可為臨床診斷結果或已上市同類(lèi)產(chǎn)品檢測結果。如有條件，盡量納入不同B19病毒基因型的患者樣本進(jìn)行驗證。

4.分析特異性

4.1交叉反應

4.1.1用于B19病毒交叉反應驗證的病原體種類(lèi)主要考慮以下幾方面：抗原結構具有同源性（如在分類(lèi)學(xué)上的近緣病毒）、易引起相同或相似的臨床癥狀、易并發(fā)感染的其他微生物（見(jiàn)表1），以及高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應驗證。

表1  用于交叉反應研究的病原體抗體

注：*為選做

4.1.2如果檢測試劑采用基因重組抗原，應增加對重組基因導入微生物特異性抗體的交叉反應評價(jià)。例如，如果采用大腸桿菌作為宿主菌，建議考慮大腸桿菌自身蛋白或載體骨架編碼的蛋白產(chǎn)生的抗體與被測物之間可能產(chǎn)生的交叉反應。

其中用于交叉反應研究用的抗體類(lèi)型應與待測目的抗體類(lèi)型相同，如申報兩種抗體類(lèi)型，用于交叉反應研究的病原體的IgM抗體、IgG抗體應分別進(jìn)行驗證。應提交所有用于交叉反應驗證的病原體抗體樣本來(lái)源、陰陽(yáng)性、種屬確認等相關(guān)信息。

4.2干擾實(shí)驗

4.2.1內源性及外源性干擾

應對樣本中可能存在的內源性及外源性干擾物質(zhì)（見(jiàn)表2）進(jìn)行研究。建議對B19病毒抗體弱陽(yáng)性、陽(yáng)性的臨床樣本，使用潛在最大濃度的干擾物質(zhì)分別進(jìn)行添加，確定是否產(chǎn)生干擾。如有干擾，梯度稀釋干擾物并進(jìn)一步確定可接受的干擾物質(zhì)的最高濃度水平，或產(chǎn)生干擾的濃度水平。應使用多份臨床樣本，每個(gè)樣本重復檢測不少于3次。申請人應描述干擾物質(zhì)的種類(lèi)，說(shuō)明樣本的制備方法及待測物的水平，以及不產(chǎn)生干擾的驗收標準。

表2 用于血液中B19病毒抗體檢測干擾研究的物質(zhì)

4.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類(lèi)型包括血漿和/或全血樣本，可采用一定數量血清、血漿、全血同源樣本進(jìn)行對比實(shí)驗研究，以驗證不同抗凝劑的適用性。

4.2.3 B19病毒IgM抗體檢測特異性驗證

對于IgM抗體檢測試劑，可采用對至少10份含有B19病毒特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結果應為陰性；或者選用其他合理的方法進(jìn)行驗證。

5.精密度

具體試驗方法可以參考相關(guān)的美國臨床實(shí)驗室標準化協(xié)會(huì )批準指南（CLSI-EP）文件或國內有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件。企業(yè)應對每項精密度指標的驗收標準做出合理要求，如標準差或變異系數的范圍等。

5.1影響精密度的條件包括：操作者、測量?jì)x器、測量程序、試劑批次、校準（校準品批次，校準周期）、運行、時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件等。除申報試劑本身外，還應對以上可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗證。

5.2設定合理的精密度評價(jià)周期。

5.3用于精密度評價(jià)的樣本應使用臨床樣本。至少包括三個(gè)水平：陰性、弱陽(yáng)性以及中等陽(yáng)性的樣本。

6.鉤狀（HOOK）效應

建議采用高滴度的B19病毒抗體陽(yáng)性臨床樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測，每個(gè)梯度重復3至5次，將顯色深度或檢測值隨滴度升高反而變淺或降低時(shí)的滴度作為出現鉤狀效應時(shí)B19病毒抗體的最低滴度。

7.企業(yè)參考品的驗證（如適用）：

根據主要原材料研究資料中企業(yè)參考品的設置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細的實(shí)驗數據。

（五）陽(yáng)性判斷值確定資料

陽(yáng)性判斷值反映區分受試者目標狀態(tài)的特征。申請人應考慮不同地理區域流行病學(xué)背景以及產(chǎn)生不同強度免疫應答反應的人群（如免疫缺陷/抑制人群）與正常人群之間的差異，選擇具有代表性的樣本建立陽(yáng)性判斷值，注意應納入一定數量的弱陽(yáng)性樣本。

建議采用受試者工作特征曲線(xiàn)（ROC）的方法確定陽(yáng)性判斷值。如采用其他研究方法，應說(shuō)明其合理性。若試驗結果存在灰區，建議申請人從臨床意義的角度出發(fā)，合理設定灰區范圍并提供灰區的確定資料。

試驗所用樣本來(lái)源應考慮到年齡（成人或兒童）、不同的感染階段（早期和晚期）和生理狀態(tài)（是否妊娠）等因素的影響。另外，建議申請人考慮建立陽(yáng)性判斷值時(shí)使用的受試者樣本對于目標人群的代表性，通過(guò)臨床試驗進(jìn)一步確認陽(yáng)性判斷值的準確性。

（六）穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩定性和適用樣本的穩定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩定性、運輸穩定性、開(kāi)瓶穩定性（如涉及）及凍融穩定性（如涉及）等研究，申請人可根據實(shí)際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實(shí)施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實(shí)時(shí)穩定性研究，應提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩定性一般包括樣本各種實(shí)際運輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認樣本的保存條件及效期（短期、長(cháng)期）。需要冷凍保存的樣本同時(shí)應對凍融次數進(jìn)行合理驗證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩定保護作用的添加劑可能會(huì )對檢測造成影響，如涉及，請對該添加劑的影響進(jìn)行合理驗證。

試劑穩定性和樣本穩定性?xún)刹糠謨热莸难芯拷Y果應在說(shuō)明書(shū)【儲存條件及有效期】和【樣本要求】?jì)身椫羞M(jìn)行詳細說(shuō)明。

（七）臨床試驗資料

臨床試驗的開(kāi)展、方案的制定以及報告的撰寫(xiě)等均應符合相關(guān)法規及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。

1.試驗方法

臨床試驗可采用試驗用體外診斷試劑與臨床普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗，證明兩者等效，從而間接證明試驗用體外診斷試劑臨床性能滿(mǎn)足預期用途的要求。對比試劑在預期用途、適用人群、樣本類(lèi)型、檢測性能等方面應與試驗用體外診斷試劑具有較好的可比性。臨床試驗方案中應針對對比試劑的選擇及依據進(jìn)行詳細描述。

對于B19病毒IgM檢測試劑，申請人還應選擇感染急性期患者采集的樣本進(jìn)行申報試劑與感染急性期判斷的方法的一致性研究，以評價(jià)申報試劑的檢測性能。用于評價(jià)的樣本可選擇處于感染急性期患者的采集樣本（不少于30例）；或者選擇商業(yè)血清轉化盤(pán)（不少于5套）?？刹捎玫挠糜诟腥炯毙云谂袛嗟姆椒?，例如：B19病毒特異性IgG抗體的血清學(xué)轉換（動(dòng)態(tài)監測2份或以上的血清IgG，恢復期與急性期比較IgG呈4倍以上升高）、核酸檢測等方法，對于B19病毒感染急性期的判斷應密切結合患者的臨床診斷綜合進(jìn)行。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗方案中應根據試驗用體外診斷試劑的預期用途、適用人群和檢測要求等合理確定臨床試驗受試者選擇要求，包括：受試者入組/排除標準、樣本收集的前瞻性和回顧性設計等，并在臨床試驗過(guò)程中嚴格遵循。

臨床試驗的入組人群應為產(chǎn)品的預期適用人群，包括各種可能接受B19病毒感染檢查的人群，例如具有疑似B19病毒感染癥狀的人群。

入組人群應包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數量的孕婦、免疫功能受損、接受免疫抑制治療的人群，應盡量覆蓋各類(lèi)適用人群。

建議臨床試驗采用前瞻性收集的樣本進(jìn)行研究，同時(shí)，在嚴格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的回顧性樣本。

另外，建議根據流行病學(xué)證據納入不同地區的患者/人群，以研究本產(chǎn)品的臨床檢出能力。

3.臨床試驗機構數量及要求

該類(lèi)產(chǎn)品臨床試驗應在三家及以上符合要求的臨床試驗機構開(kāi)展。申辦者應根據產(chǎn)品特點(diǎn)及其預期用途，綜合流行病學(xué)背景，選擇具有一定地域代表性的機構開(kāi)展臨床試驗。原則上應具有相關(guān)學(xué)科的優(yōu)勢，實(shí)驗操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統的各環(huán)節，熟悉評價(jià)方案。

4.樣本類(lèi)型

B19病毒抗體檢測試劑的樣本類(lèi)型通常涉及血清、血漿等。如血清與血漿樣本之間經(jīng)研究不存在性能差異，可以在各具有一定數量陰/陽(yáng)性樣本的前提下，通過(guò)合并統計的方式證明兩種樣本類(lèi)型的適用性。

臨床樣本的采集、處理、保存等應分別滿(mǎn)足臨床試驗中所涉及各產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求。

5.臨床試驗樣本量估算

適當的樣本量是保證申報產(chǎn)品臨床性能得到準確評價(jià)的必要條件。臨床試驗樣本量應滿(mǎn)足統計學(xué)要求，可采用適當的統計學(xué)方法進(jìn)行估算。

當采用申報產(chǎn)品與已上市同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行對比試驗時(shí)，可采用單組目標值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z_1-α/2、Z_1-β為顯著(zhù)性水平和把握度的標準正態(tài)分布的分數位，P₀為評價(jià)指標的臨床可接受標準，P_T為試驗用體外診斷試劑評價(jià)指標預期值。

對于B19病毒抗體檢測試劑的臨床陰/陽(yáng)性符合率，基于目前的科學(xué)認識，建議P₀不低于90%。當選定的產(chǎn)品的符合率預期值（P_T）遠高于預期目標值時(shí)，應采用其他的方法進(jìn)行樣本類(lèi)的估算。當評價(jià)指標P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

臨床試驗樣本量除需滿(mǎn)足上述統計學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；臨床試驗樣本應包含一定數量的醫學(xué)決定水平附近樣本或灰區樣本。

6.臨床評價(jià)指標的選擇與統計學(xué)分析

臨床評價(jià)指標應在臨床試驗的設計階段確定，并在臨床試驗方案中予以明確。

對于此類(lèi)檢測試劑的比較研究試驗，臨床評價(jià)指標主要包括試驗用體外診斷試劑與已上市同類(lèi)產(chǎn)品相比的陽(yáng)性符合率、陰性符合率等。統計分析一般以2×2表的形式總結兩種分析方法的檢測結果，并據此計算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率等指標及其95%可信區間。除此之外，還應同時(shí)進(jìn)行假設檢驗評價(jià)兩種分析方法的一致性。結果不符樣本的復核結果不應納入上述統計。

7.結果不符的樣本

對于比較研究試驗中申報產(chǎn)品與對比產(chǎn)品檢測不一致的結果，應進(jìn)行合理的分析。如采用實(shí)驗室參考方法或第三方檢測試劑進(jìn)行確認，結果不應用于修訂原有統計結果。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩定的前提下，根據申請人產(chǎn)品研制以及前期性能評價(jià)的結果，依據國家標準、行業(yè)標準及相關(guān)文獻，按照《醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則》（原國家食品藥品監督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。

B19病毒IgM/IgG抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標應主要包括：陰/陽(yáng)性參考品符合率、最低檢測限、精密度等。

如果申報試劑已有適用的國家標準品、參考品發(fā)布，則申請人應在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出符合性的要求。

按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》的規定，此類(lèi)產(chǎn)品為第三類(lèi)體外診斷試劑，申請人應按照《醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應符合相關(guān)編寫(xiě)規范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據《體外診斷試劑注冊管理辦法》的要求，申請注冊的第三類(lèi)體外診斷試劑產(chǎn)品應在具有相應醫療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫療器械檢驗機構進(jìn)行連續3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的產(chǎn)品檢驗。

對于已經(jīng)有國家參考品的項目，應提供產(chǎn)品能夠符合國家標準品、參考品要求的產(chǎn)品檢驗報告。對于目前尚無(wú)國家參考品的項目，提供產(chǎn)品能夠符合企業(yè)參考品要求的產(chǎn)品檢驗報告。

（十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

1.【預期用途】

產(chǎn)品預期用途的描述應符合現行的疾病診療指南、專(zhuān)家共識。應至少包括以下內容：

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人體血清或血漿等樣本中的人細小病毒B19lgM/lgG抗體。

適用樣本類(lèi)型應結合申報產(chǎn)品臨床性能的確認情況進(jìn)行描述。

1.2病毒特征以及臨床適應癥背景：簡(jiǎn)要描述B19病毒生物學(xué)特征及致病性，感染后臨床表現，相關(guān)的臨床或實(shí)驗室診斷方法等。人群中B19病毒特異性抗體的陽(yáng)性率，不同類(lèi)型B19病毒抗體的產(chǎn)生、持續時(shí)間、臨床提示作用及與B19病毒感染診斷的其他方法的關(guān)聯(lián)等。

1.3目標人群：依據臨床試驗的入組人群進(jìn)行編寫(xiě)。

1.4產(chǎn)品功能：結合目標人群的臨床表現和其他診斷指標，用于B19病毒感染的輔助診斷。

1.5明確B19病毒抗體檢測不得用于無(wú)癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測結果單獨作為終止妊娠的依據。

2.【主要組成成分】

2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱(chēng)、數量、比例或濃度等信息，質(zhì)控品應明確具體基質(zhì)成分。對于膠體金試劑應描述試劑條/卡結構組成。校準品應明確溯源性，質(zhì)控品應提交靶值單。明確不同批次組分能否混用。

2.2介紹檢測中使用的抗原/抗體信息及標記物信息，包括抗原的性質(zhì)（如純化的天然抗原、重組抗原等）、抗體的動(dòng)物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克?。?、標記物種類(lèi)等。

2.3試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應列出相關(guān)試劑的名稱(chēng)、注冊證號/備案號（如有）、貨號等其他相關(guān)信息。

3.【儲存條件及有效期】

詳細介紹試劑盒的效期穩定性、開(kāi)封穩定性、運輸穩定性等信息。

4.【適用機型】

對于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測試劑應明確適用酶標儀的波長(cháng)要求，其他方法學(xué)的檢測試劑應明確具體的適用機型型號。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內容

5.1樣本采集前的要求：如采集時(shí)間、采集量，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

5.2樣本采集：說(shuō)明采集方法及樣本類(lèi)型，對于血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求。

5.3干擾物的影響：明確常見(jiàn)干擾物對實(shí)驗結果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

5.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復室溫，冷凍樣本的凍融次數限制等。

6.【檢驗方法】

詳細說(shuō)明試驗操作的各個(gè)步驟：

6.1實(shí)驗環(huán)境：檢測試劑及樣本的復溫要求等。

6.2試劑配制方法，試劑開(kāi)封后使用方法等。

6.3高濃度樣本稀釋的方法。

6.4試驗條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(cháng)等。

6.5定標（如適用）：標準曲線(xiàn)的制定，對需要進(jìn)行重新定標情況的說(shuō)明及對定標周期的建議。

6.6質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結果不符合要求的處理方式。

6.7對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序及注意事項等。特別注意應強調操作溫度及濕度條件、讀取結果的時(shí)間。

6.8特別說(shuō)明檢驗操作過(guò)程中的注意事項。

7.【檢驗結果的解釋】

詳細描述檢測結果的判定標準。

建議參考相關(guān)臨床診療指南進(jìn)行描述，包括所有可能出現的B19IgM/IgG結果組合及相應的解釋?zhuān)罄m的處理措施等。如有灰區判定，應詳細說(shuō)明灰區樣本的處理方式。

8.【檢驗方法局限性】

結合產(chǎn)品的預期用途、臨床適應癥背景、檢測方法及適用人群等，對可能出現的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明。

9.【產(chǎn)品性能指標】

詳述以下性能指標：

9.1對相應國家參考品（如有）檢測的符合情況。

9.2企業(yè)內部陽(yáng)性和陰性參考品符合率。

9.3最低檢測限：簡(jiǎn)要介紹評價(jià)方法、所用樣本以及評價(jià)結果。

9.4分析特異性

9.4.1交叉反應：詳述交叉反應驗證的病原體種類(lèi)，及有/無(wú)交叉反應的濃度水平。

9.4.2干擾物質(zhì)：說(shuō)明驗證的干擾物質(zhì)種類(lèi)及有/無(wú)干擾反應的濃度水平。

9.5精密度：簡(jiǎn)要介紹評價(jià)方法、所用樣本以及評價(jià)結果。

9.6鉤狀（HOOK）效應：對鉤狀效應的驗證情況進(jìn)行總結。

9.7包容性驗證：簡(jiǎn)要介紹樣本來(lái)源和結論。

10.【注意事項】

應至少包括以下內容：

10.1有關(guān)試劑盒內人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類(lèi)免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結果為陰性，但截至目前，沒(méi)有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

10.2有關(guān)實(shí)驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻

1.賈俊婷等.人細小病毒B19 檢測技術(shù). J Clin Transfus Lab Med，August．2015，Vol 17，No．5

2.陳軍等.人類(lèi)細小病毒感染研究進(jìn)展.J Diagn Concepts Pract 2008，Vo1．7，No．4

3.張國成.兒童微小病毒B19感染的診斷與治療.臨床兒科雜志第26卷第6期2008年6月

4.章錦曼等. TORCH 感染篩查、診斷與干預原則和工作流程專(zhuān)家共識.中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志2016年6月第32卷第6期

5.周海衛等.人細小病毒B19 IgG 抗體檢測試劑國家參考品的建立及應用.Labeled Immunoassays ＆ Clin Med，Feb．2018，Vol．25，No．2

6.羅青清等.“妊娠期微小病毒B19感染的臨床實(shí)踐指南”解讀.中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志2016年6月第32卷第6期

7.王穎等.妊娠期微小病毒B19感染的診斷與處理.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志2018年12月第34卷第12期

四、起草單位

國家藥品監督管理局醫療器械技術(shù)審評中心。