引言：2020年1月9日，國家藥監局發(fā)布公告，對《同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）》面向公眾公開(kāi)征求意見(jiàn)，這個(gè)指導原則，對無(wú)菌醫療器械注冊產(chǎn)品有重大影響。

各有關(guān)單位：
　　為規范同種異體植入性醫療器械注冊申報中病毒滅活工藝驗證相關(guān)資料，根據國家藥品監督管理局2019年度醫療器械注冊技術(shù)指導原則制修訂計劃的有關(guān)要求，我中心組織起草了《同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）》。經(jīng)調研討論，形成征求意見(jiàn)稿。
　　為使該指導原則更具有科學(xué)合理性及實(shí)際可操作性，即日起在我中心網(wǎng)上公開(kāi)征求意見(jiàn)，衷心希望相關(guān)領(lǐng)域的專(zhuān)家、學(xué)者、管理者及從業(yè)人員提出意見(jiàn)或建議，推動(dòng)指導原則的豐富和完善。
　　請將意見(jiàn)或建議以電子郵件的形式于2020年2月7日前反饋我中心。
　　聯(lián)系人：孫嘉懌、李曉云
　　電話(huà)： 010-86452810、010-86452822
　　電子郵箱：sunjy@cmde.org.cn，lixy@cmde.org.cn

　　附件：1.同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）（下載）
　　　　　2.意見(jiàn)反饋表（下載）

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　國家藥品監督管理局

醫療器械技術(shù)審評中心

2020年1月9日

同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導原則（2019年修訂）

一、前言

同種異體植入性醫療器械是以同種來(lái)源組織為原料經(jīng)加工或組成的產(chǎn)品。

我國目前對同種異體植入性醫療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測血清中的病毒核酸。但是，盡管對供體進(jìn)行了嚴格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風(fēng)險，以及生產(chǎn)過(guò)程中帶入外源病毒的風(fēng)險。因此，要求同種異體植入性醫療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程中采用有效的病毒滅活工藝，并對病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗證。

本指導原則是對同種異體植入性醫療器械生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗證的一般要求，申請人應依據具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數等，并依據具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內容是否適用。

本指導原則是對申請人和審評人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著(zhù)法規和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內容也將進(jìn)行適時(shí)的調整。

本指導原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導原則》的修訂版。主要修訂內容包括：修改指導原則中相關(guān)語(yǔ)言描述；完善指示病毒類(lèi)型及舉例的相關(guān)描述；調整病毒滅活/去除有效性驗證的原則。

二、適用范圍

本指導原則適用于需要對生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗證的同種異體植入性醫療器械。

三、基本要求

（一）常用的病毒滅活方法

同種異體植入性醫療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應根據產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應綜合考慮以下問(wèn)題，包括病毒滅活效果的驗證；病毒滅活工藝對產(chǎn)品性能的影響；病毒滅活工藝本身的公認性、可靠性、重現性、易放大性及經(jīng)濟性。常用的病毒滅活方法舉例如下：

1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，是國內外公認的病毒滅活方法。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。

2.干熱滅活法

干熱滅活法主要用于凍干制品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已為實(shí)驗室驗證和臨床應用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。干熱滅活法的優(yōu)勢是可用于凍干后的同種異體植入性醫療器械。采用該方法時(shí)應考慮溫度分布的均一性、凍干工藝和產(chǎn)品水分殘留量等。

3.γ射線(xiàn)輻照滅活法

γ射線(xiàn)輻照滅活法的主要優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強、劑量易控制、無(wú)有害物質(zhì)殘留、無(wú)明顯溫度升高等。該方法主要通過(guò)破壞核酸而滅活病毒。由于病毒在不同介質(zhì)中對射線(xiàn)的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫療器械的病毒滅活時(shí)，應去除產(chǎn)品中的宿主組織和細胞，例如同種異體骨應充分清洗血液及骨髓成分。應根據產(chǎn)品的特性確定輻照劑量。采用該方法時(shí)應考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。

4.過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法

過(guò)氧乙酸具有極強的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫療器械中。過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒（PV）、HIV、偽狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細小病毒（PPV）等多種病毒，其用于同種異體植入性醫療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗室和臨床試驗所證實(shí)。采用該方法時(shí)應嚴格控制產(chǎn)品過(guò)氧乙酸殘留量。

5.乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對多數有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應充分清洗血液及骨髓成分，應采用浸泡處理，采用該方法時(shí)應考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。

（二）病毒滅活工藝的驗證

1.指示病毒的選擇

應選擇可能污染的病毒，或理化性質(zhì)相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類(lèi)型以及有無(wú)包膜等方面應具有代表性，應包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。應根據產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，應至少選擇四類(lèi)指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應包括HIV和HAV、HBV、HCV的指示病毒

表1 可經(jīng)同種異體植入性醫療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及

可選用的指示病毒（舉例）

注：DHBV：鴨乙型肝炎病毒；CPV：犬細小病毒。

2.染毒方法

由于同種異體植入性醫療器械多為固體形態(tài)，應盡量模擬植入材料的病毒負載方式，同時(shí)考慮材料的結構、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，建議采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應至少≥106/mL，可根據產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。

3.方案設計

（1）試驗分組：應進(jìn)行合理分組，注意設置全面的對照組，以確保結果的科學(xué)性。建議至少包括細胞空白對照組、病毒對照組、樣品細胞毒性對照組或滴定前進(jìn)行細胞毒性試驗、病毒滅活方法終止對照組及試驗組。其中，病毒對照組的滴度是計算滅活量的基礎，應證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果對照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應與病毒對照組相當或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設定的時(shí)間終止作用。試驗組至少應有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動(dòng)力學(xué)，包括滅活動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)。

（2）觀(guān)察指標：

①滅活病毒的滴度，采用細胞病變或其他適宜的指標。

②病毒滅活速率、滅活曲線(xiàn)。以列表和做圖形式報告驗證結果。

（3）病毒滅活效果的判定

應綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評價(jià)每次驗證結果。

①所選擇的病毒是否適宜，驗證的設計是否合理。

②病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過(guò)與病毒滅活后測定的殘留病毒量的比較，計算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測方法的靈敏度造成檢測出的病毒降低系數接近但小于4 logs時(shí)，應盲傳三代，如無(wú)病毒檢出，亦可認為是有效地去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過(guò)程中估計去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數量的總和。但是由于驗證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1 log，則不宜將其計算在總量中。

③病毒滅活動(dòng)力學(xué)：病毒滅活通常不是簡(jiǎn)單的一級反應，評價(jià)驗證結果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動(dòng)力學(xué)。需以作圖的形式報告滅活動(dòng)力學(xué)驗證結果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說(shuō)明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結束時(shí)才達到最低檢出限度值，則不能認為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對該滅活方法有抵抗力，說(shuō)明該步病毒滅活方法無(wú)效。

4.病毒滅活工藝驗證原則

（1）若申請人采用一個(gè)病毒滅活工藝，應同時(shí)對有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒等四類(lèi)病毒或其指示病毒（參見(jiàn)表1）的滅活效果均達到4logs以上，可認為是有效病毒滅活工藝。

（2）若申請人采用一個(gè)病毒滅活工藝，無(wú)法滿(mǎn)足（1）的要求，建議申請人生產(chǎn)過(guò)程中采用兩種（或兩種以上）不同滅活原理的病毒滅活工藝，并分別進(jìn)行病毒滅活效果驗證，保證每個(gè)病毒有至少一個(gè)滅活工藝可使其滅活效果達到4logs以上。

（3）若采用的病毒滅活/去除工藝將導致醫療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據產(chǎn)品來(lái)源、采集及過(guò)程控制情況以及對患者的風(fēng)險/受益分析來(lái)判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低系數仍需達到4 logs以上。

5．舉例說(shuō)明病毒滅活效果的判斷

（1）初始病毒負載率為6 logs ，檢測到剩余病毒量為4 logs，則該病毒滅活工藝不是有效工藝，只能說(shuō)明具有一定的病毒滅活作用。

（2）初始病毒負載量為6 logs ，但由于產(chǎn)品本身的細胞毒作用使得檢測靈敏度限值為4 logs ，僅能證明滅活2 logs 的病毒。此種情況需改變試驗設計重新進(jìn)行驗證，或者應盲傳三代，如仍無(wú)病毒檢出，可認為是有效的病毒滅活方法。

（3）初始病毒負載率為6 logs ，但仍可檢測到2 logs 的剩余病毒，且清除病毒的量可重復，并不受工藝的影響，應認為是有效的滅活病毒的方法。

（4）初始病毒負載量為6 logs ，之后未檢測出病毒。但是由于檢測靈敏度限值為2 logs ，僅能認為大約滅活了4 logs 病毒。事實(shí)上可能等于或大于4 logs ，因此應判定此方法清除的病毒量≥4 logs。

6．其他需考慮的問(wèn)題

（1）病毒滅活驗證研究應在具有相應資質(zhì)的單位完成。

（2）如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測定，應考慮這些處理方法對病毒檢測結果的影響。

（3）模擬的生產(chǎn)工藝參數應盡可能與實(shí)際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應時(shí)間等。應分析生產(chǎn)工藝中各種參數的偏差對病毒滅活效果的影響。

（4）病毒滅活工藝對不同類(lèi)型病毒滅活的選擇性。

（三）病毒滅活工藝的再驗證

生產(chǎn)過(guò)程發(fā)生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時(shí)；被滅活前產(chǎn)品的組成或pH值發(fā)生改變時(shí)，均需對病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗證。

四、名詞解釋

1．同種異體植入性醫療器械：是指以人體來(lái)源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細胞異體真皮等。

2．植入性醫療器械：用于下列目的的醫療器械：

－ 全部導入人體；

－ 替代上皮表面或眼表面；

通過(guò)外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過(guò)外科侵入方法，部分導入人體保留至少30天的器械，也認作是植入性器械。

3．病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。

五、參考文獻

1．《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導原則》（國藥監注〔2002〕160號）

2．《消毒技術(shù)規范》衛生部2002版

3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》